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鄭州寶晶告訴您流動相使用前為什么要脫氣?
雙擊自動滾屏 發布者:鄭州寶晶電子科技有限公司 發布時間:2020/12/7 閱讀:15495

    流動相使用前為什么要脫氣?

  流動相使用前必須進行脫氣處理 ,以除去其中溶解的氣體(如O2),以防止在洗脫過程中當流動相由色譜柱流至檢測器時,因壓力降低而產生氣泡。氣泡會增加基線的噪音,造成靈敏度下降,甚至無法分析。溶解的氧氣還會導致樣品中某些組份被氧化,柱中固定相發生降解而改變柱的分離性能。若用FLD,可能會造成熒光猝滅。

常用的脫氣方法比較:

氦氣脫氣法:利用液體中氦氣的溶解度比空氣低,連續吹氦脫氣,效果較好,但成本高。

加熱回流法:效果較好,但操作復雜,且有毒性揮發污染。

抽真空脫氣法:易抽走有機相。

超聲脫氣法:流動相放在超聲波容器中,用超聲波振蕩10-15min,此法效果最差。

在線真空脫氣法:Agilent1100LC真空脫機利用膜滲透技術, 在線脫氣,智能控制,無需額外操作,成本低,脫氣效果明顯優于以上幾種方法,并適用于多元溶劑體系。

1、為什么溶劑和樣品要過濾?

  溶劑和樣品過濾非常重要,它會對色譜柱、儀器起到保護作用,消除由于污染對分析結果的影響。

色譜柱:由于填料顆粒很細,色譜柱內腔很小,溶劑和樣品中的細小顆粒會使色譜柱和毛細管容易堵塞。

儀器:溶劑和樣品中的細小顆粒會增加進樣閥的堵塞和磨損,同時也會增加泵頭內的藍寶石活塞桿和活塞的磨損。

樣品過濾頭的類型

30mm內徑:適用于大進樣量的過濾,由0.2μm和0.45μm兩種規格,材料有纖維素,醋酸纖維,聚四氟乙烯。處理樣品體積少于50μl。

13mm內徑:適用于范圍廣的過濾,由0.2μm和0.45μm兩種規格,材料為纖維素。

3mm內徑:適用于小進樣量的過濾,由0.2μm和0.45μm兩種規格。處理樣品體積為7μl。

濾膜類型:

聚四氟乙烯濾膜:適用于所有溶劑,酸和鹽,并無任何可溶物。

醋酸纖維濾膜:不適用于有機溶劑,特別適用于水基溶液,推薦用于蛋白質和其相關樣品。

尼龍66濾膜:適用于絕大多數有機溶劑和水溶液,可用于強酸,70%乙醇、二氯甲烷、不適用于二甲基甲酰胺。

再生纖維素濾膜:具有蛋白吸收低,同樣適用水溶性樣品和有機溶劑。

2、為什么HPLC用緩沖鹽時要加在線Seal-wash選項?

  HPLC用緩沖鹽時,由于泵頭內的緩沖鹽溶液存在高壓析鹽現象,析出的細小鹽粒非常堅硬,它附著在藍寶石活塞桿上,隨著藍寶石活塞桿的往復運動,容易產生劃痕,并磨損密封墊,造成漏液等故障現象。在線Seal-wash選項能有效的帶走可能存在的緩沖鹽結晶。緩沖鹽的濃度在0.1mol或大于0.1mol時,必須使用該在線沖洗選項.

  清洗液配制: 90%水+10%異丙醇.該混合液可抑制菌類生長和減小水的表面張力。以2-3滴/min的速度虹吸流下,不能干涸。

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